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乳酸含量(LA)檢測試劑盒 微量法

2024/10/10 13:11:09  作者:索萊寶


乳酸含量(LA)檢測試劑盒 微量法

測定意義:乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關,乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。

測定原理:乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時使NAD+還原生成NADH和H+,H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質,在530nm處有特征吸收峰。

需要的儀器,耗材:天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、

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   乳酸含量(LA)檢測試劑盒 微量法

一、樣本處理 1. 組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取上清測定。 2. 細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入 1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃, 12000g離心10min,取上清測定。 3. 血清:直接測定。二、測定操作樣品對照管 樣品測定管 標準對照管 標準測定管樣品(μL) 50 50 標準品(μL) 50 50 Solarbio  H2O(μL) 300 450 300 450 試劑一(μL) 150 150 試劑二(μL) 200 200 200 200 顯色液(μL) 300 300 300 300 充分混勻,于37℃反應30min,于1mL玻璃比色皿,蒸餾水調零,測定530nm處吸光值,分別記為A1,A2,A3,A4,△A樣=A2-A1;△ A標= A4-A3 注意:標準對照管和標準測定管只需測定一次 ,每個樣品測定管設一個樣品對照管。

 

1. 按照蛋白含量計算 LA含量(μmol/mg prot)= △A樣÷△A標×C標÷ Cpr = 2×△A樣÷△A標÷ Cpr 2. 按照樣本質量計算 LA含量(μmol/g鮮重)= △A樣÷△A標×C標÷ W = 2×△A樣÷△A標÷ W 3. 按照細胞數量計算 LA含量(μmol/104 cell)= △A樣÷△A標×C標÷ 細胞數量 = 2×△A樣÷△A標÷ 細胞數量 4. 按照液體體積計算 LA含量(μmol/mL)= △A樣÷△A標×C標 = 2×△A樣÷△A標 C標:標準品濃度,2mmol/L,W:樣本質量,g/mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL

相關文獻:

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Wearable Carbon Nanotube-Based BioSensors on Gloves for Lactate》 作者:Xiaojin Luo, Weihua Shi , Haoming Yu , Zhaoyang Xie , Kunyi Li  and Yue Cui  期刊:Sensors 影響因子:3.031 PMID:30314270

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