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過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒 微量法

2025/1/10 8:45:31  作者:索萊寶


 過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒 微量法說明書

貨號: BC0205 規(guī)格:100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容: 提取液:100mL×1 瓶,4℃保存; 工作液:24mL×1 瓶,4℃保存;

產(chǎn)品簡介: CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是主要的 H2O2清除酶,在活性氧清除系 統(tǒng)中具有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能夠分解 H2O2,使反應溶液 240nm 下的吸光度隨反應時間而下降,根 據(jù)吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。

 

 購買鏈接:BC0205 產(chǎn)品規(guī)格檢索 (labgogo.com)

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過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒 微量法操作步驟

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液,超聲波破碎細菌或 細胞(功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次);8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 2、 血清(漿)樣品:直接檢測。

二、操作步驟 1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 240nm,蒸餾水調(diào)零。 2、 測定前將 CAT 檢測工作液 37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)水浴 10min。 3、 加入 10μL 樣本和 190μL 工作液,混勻 5s 或者在酶標儀上振動 5s 并立即計時,記錄 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2

三、CAT 活性計算(用石英比色皿):

1、 血清(漿)CAT 活力的計算: 單位的定義:每毫升血清(漿)在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mL)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(43.6×10 -3)×ΔA=459×ΔA

2、 組織 CAT 活力計算: (1) 按樣本蛋白濃度計算: 單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mg prot)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(43.6×10 -3)×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL) =459×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL) (2) 按樣本鮮重計算: 單位的定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/g mass)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2 消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷樣本鮮重(g/mL) =459×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)

3、 細菌或細胞中 CAT 活力計算: 單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/10 4 cell)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷細胞密度(10 4 cell /mL) =0.917×ΔA V 反總:反應體系總體積,2×10 -4L;ε: NADH 摩爾吸光系數(shù),4.36×10 4L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm; V 樣:加入樣本體積,0.01ml;V 樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應時間,1min。W,樣本質(zhì)量,g;Cpr: 上清液蛋白濃度,mg/ml;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。

CAT 活性計算(用 96 孔板):

1、 血清(漿)CAT 活力的計算: 單位的定義:每毫升血清(漿)在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mL)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA=918×ΔA

2、 組織 CAT 活力計算: (1) 按樣本蛋白濃度計算: 單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mg prot)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL) =918×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL) (2) 按樣本鮮重計算: 單位的定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/g mass)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2 消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷樣本鮮重(g/mL) =918×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)

3、 細菌或細胞中 CAT 活力計算: 單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/10 4 cell)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷細胞密度(10 4 cell /mL) =1.836×ΔA V 反總:反應體系總體積,2×10 -4L;ε: NADH 摩爾吸光系數(shù),4.36×10 4L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm; V 樣:加入樣本體積,0.01ml;V 樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應時間,1min。W,樣本質(zhì)量,g;Cpr: 上清液蛋白濃度,mg/ml;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。 1、 預實驗如果發(fā)現(xiàn)酶活性過高(其實 OD 值過大),可用提取液適當稀釋樣品。 2、 如果酶活性過低,延長反應時間(3 分鐘之內(nèi)),并將反應時間準確代入計算公式。

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液,超聲波破碎細菌或 細胞(功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次);8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 2、 血清(漿)樣品:直接檢測。

相關文獻:
《Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton》 作者:Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,Yanyan Li,Muhammad Ali Abid,Muhammad Askari,Peilin Wang,Yuan Wang,Guoqing Sun,Yongping Cai,Shou-Yi Chen,Yi Lin,Rui Zhang,Sandui Guo 期刊:Environmental and Experimental Botany 影響因子:3.712 PMID:
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