土壤中性蛋白酶活性檢測試劑盒 微量法
土壤中性蛋白酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓
英文名稱：Soil neutral protease activity detection kit
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
注意：正式測定之前選擇2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
貨號：BC0275
規(guī)格：100T/48S
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：土壤中性蛋白酶|土壤中性蛋白酶活性檢測|蛋白酶活性檢測
購買鏈接：BC0275 產(chǎn)品規(guī)格檢索 (labgogo.com)
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入10mL試劑一，沸水浴攪拌溶解后待用；
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入10mL 蒸餾水充分溶解待用；
試劑四：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑五：液體5mL×1 瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1 支，0.2 μmol/mL 酪氨酸溶液，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。中性條件下，土壤中性蛋白酶可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)，在680nm 有特征吸收峰。
實驗中所需儀器及設(shè)備：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量比色皿/96孔板、甲苯、蒸餾水、50目篩（或更?。?。
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50 目篩。
操作步驟：
1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長680nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定：
試劑名稱 測定管 對照管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
風(fēng)干土樣（g） 0.05 0.05 - -
試劑一（μL） 50 50 - -
試劑二（μL） 100 - -
混勻后，37℃反應(yīng)24h，期間振蕩5-6 次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸。
試劑三（μL） 100 100 - -
試劑二（μL） - 100 - -
混勻，10000rpm 室溫離心10min，取上清液
上清液（μL） 44 44 - -
標(biāo)準(zhǔn)液（μL） - - 44 -
蒸餾水（μL） - - - 44
試劑四（μL） 130 130 130 130
試劑五（μL） 26 26 26 26
混勻，40℃水浴10min，10000rpm 室溫離心10min，取上清液于680nm 下讀取各管吸光值A(chǔ)，分別記為A 測定管、A 對照管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管，計算ΔA 測定=A 測定管-A 對照管，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。
注意：標(biāo)準(zhǔn)管、空白管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。
土壤中性蛋白酶活性計算：
單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol 酪氨酸為一個土壤中性蛋白酶活力單位。土壤中性蛋白酶(U/g)=C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V 反總÷W÷T= 0.05×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W。
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.2 μmol/mL；
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.25mL；
T：反應(yīng)時間，1d；
W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項：
1、當(dāng)吸光值大于1.5時，建議將上清液稀釋后進(jìn)行測定，計算時注意乘以稀釋倍數(shù)。
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Evaluating the effects of phytoremediation with biochar additions on soil nitrogen mineralization enzymes and fungi》 作者:Manyun Zhang,Jun Wang, Shahla Hosseini Bai, Ying Teng,Zhihong Xu 期刊:Environmental Science and Pollution Research 影響因子:2.914 PMID:29860689