阿苯達(dá)唑的危害及檢測(cè)目的
阿苯達(dá)唑（ABZ）又名丙硫咪唑，是苯并咪唑類驅(qū)蟲(chóng)藥物，因其治療效果好、毒性小等方面的優(yōu)勢(shì)，被廣泛用于治療動(dòng)物的腸道寄生蟲(chóng)感染病，是目前獸醫(yī)臨床使用最廣泛藥物之一。阿苯達(dá)唑進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后會(huì)快速代謝為阿苯達(dá)唑亞砜（ABZSO），阿苯達(dá)唑亞砜進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為阿苯達(dá)唑砜（ABZSO2），最終代謝為2-氨基阿苯達(dá)唑砜（ABZSO2-2-NH2）。因此，為監(jiān)控阿苯達(dá)唑藥物的使用情況，保障動(dòng)物源性食品的安全，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》中明確規(guī)定了阿苯達(dá)唑在所有食品動(dòng)物靶組織中的殘留標(biāo)志物及殘留限量。
檢測(cè)項(xiàng)目：阿苯達(dá)唑、阿苯達(dá)唑亞砜、阿苯達(dá)唑砜、2-氨基阿苯達(dá)唑砜
應(yīng)用范圍：水產(chǎn)品（蝦、蟹、魚(yú)）
高效液相色譜法
方法原理：試料中殘留的阿苯達(dá)唑及代謝物，用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，乙酸乙酯反萃取，高效液相色譜-熒光檢測(cè)器測(cè)定，外標(biāo)法定量。
前處理儀器：
分析天平（感量0.01 g 和0.00001 g）；均質(zhì)機(jī)；離心機(jī)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；氮吹儀；梨形瓶（100mL）；濾膜（有機(jī)相0.45 μm）。
檢測(cè)儀器：HPLC-FLD
試樣的制備與保存
取適量新鮮或冷凍的魚(yú)，去鱗、去皮，沿脊背取肌肉；蝦，去頭、去殼，取肌肉部分。絞碎，并使均質(zhì)。
取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。
取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。
取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為空白添加試料。
試料于零下20 ℃ 以下保存。
前處理方法
1.蝦、蟹類
提?。悍Q取試料2 g±0.02 g，于50 mL離心管中，加乙酸乙酯15 mL，均質(zhì)30 s，振蕩5 min，4000 r/min離心10 min，取上清液于100 mL梨形瓶中，殘?jiān)鼈溆?。另取?0 mL離心管，加乙酸乙酯15 mL，清洗均質(zhì)機(jī)30 s，洗滌液于殘?jiān)?，振? min，4000 r/min離心10 min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用20 %甲醇溶液1.0 mL溶解殘?jiān)３簩⑸鲜鋈芤阂迫?0 mL離心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗滌，正己烷轉(zhuǎn)入離心管中，振蕩1 min，4000 r/min離心5 min，棄正己烷層液，再加入正己烷1 mL，重復(fù)操作兩次，取下層液備用。
凈化：備用液中加0.04 mol/L磷酸1 mL，混勻，加二氯甲烷1.5 mL，混合1 min，4000 r/min離心5 min，取二氯甲烷液于10 mL離心管中，再加二氯甲烷1.5 mL，重復(fù)提取兩次，合并三次二氯甲烷液于10 mL離心管中，于35 ℃氮?dú)獯蹈?；?.02 mol/L磷酸氫二鈉溶液1.0 mL溶解殘余物，加乙酸乙酯2 mL，混合1 min，4000 r/min離心5 min，將乙酸乙酯液移入另一10 mL離心管中，再向磷酸氫二鈉溶液中加乙酸乙酯2 mL，重復(fù)提取兩次，合并三次乙酸乙酯液，于40 ℃氮?dú)獯蹈?，?0 %甲醇-水1.0 mL溶解殘留物，濾膜過(guò)濾，供液相色譜測(cè)定。
2.魚(yú)類
提?。悍Q取試料2 g±0.02 g，于50 mL離心管中，加乙酸乙酯15 mL，均質(zhì)30 s，振蕩5 min，4000 r/min離心10 min，取上清液于100 mL梨形瓶中，殘?jiān)鼈溆?。另取?0 mL離心管，加乙酸乙酯15 mL，清洗均質(zhì)機(jī)30 s，將此液倒入上述殘?jiān)姓袷幪崛? min，4000 r/min離心10 min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 ℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入20 %甲醇溶液1.0 mL溶解殘?jiān)?br />
除脂：將上述溶液移入10 mL離心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗滌，正己烷轉(zhuǎn)入離心管中，振蕩1 min，4000 r/min離心5 min，去除正己烷層，再加入正己烷1 mL，依法重復(fù)操作兩次。下層溶液過(guò)0.45 μm有機(jī)相濾膜，供液相色譜測(cè)定。
國(guó)標(biāo)解讀及注意事項(xiàng)
1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用甲醇配成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在零下18 ℃以下避光保存，可使用3個(gè)月。
2.本方法中魚(yú)類的提取凈化方式為：乙酸乙酯提取兩次，正己烷除脂三次；蝦和蟹的提取凈化方式為：乙酸乙酯提取兩次，正己烷除脂三次，二氯甲烷和乙酸乙酯反萃取三次。所有基質(zhì)均相當(dāng)于2 g試料上機(jī)檢測(cè)。
3.由于蝦蟹基質(zhì)中會(huì)混入蟹黃等雜質(zhì)，油脂含量高，顏色較深，所以需要通過(guò)使用二氯甲烷和乙酸乙酯進(jìn)行反萃取，達(dá)到去除雜質(zhì)，提高目標(biāo)物回收率的效果。
4.根據(jù)基質(zhì)中含油脂量的多少，調(diào)整正己烷除脂的次數(shù)。
5.本方法采用多次提取的方式提高目標(biāo)化合物的回收率。
6.本方法使用基質(zhì)流程曲線進(jìn)行定量，根據(jù)實(shí)際樣品選擇適合的基質(zhì)種類進(jìn)行加標(biāo)。