添加蛋白酶抑制劑是大多數(shù)細(xì)胞裂解和蛋白質(zhì)提取的必要步驟。蛋白質(zhì)提取過程中，內(nèi)源性蛋白酶會降解蛋白質(zhì)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)產(chǎn)量的降低。在裂解試劑中加入蛋白酶抑制劑，可防止提取蛋白的降解，確保在細(xì)胞裂解后獲得蛋白質(zhì)的產(chǎn)量。
蛋白酶抑制劑是生物或化學(xué)化合物，其作用是可逆或不可逆地結(jié)合蛋白酶。大多數(shù)已知的蛋白酶屬于四個進(jìn)化上不同的酶家族之一，基于功能基團(tuán)參與肽鍵的裂解。一般情況下，蛋白提取過程中總是需要使用蛋白酶抑制劑。大多數(shù)情況下，需使用幾種不同抑制劑化合物的混合物（也稱Cocktail,雞尾酒），以確保蛋白質(zhì)提取物在分析之前不會降解。
常見蛋白酶抑制劑
常見蛋白酶抑制劑活性組分
| 抑制劑 |
分子量 |
靶點(diǎn) |
機(jī)制 |
溶解度（溶劑） |
工作濃度 |
| 氟化鈉 |
42 |
絲氨酸/蘇氨酸和酸性磷酸酶 |
不可逆 |
40mg/mL (H2O) |
1 to 20mM |
| 原釩酸鈉 |
183.9 |
酪氨酸和堿性磷酸酶 |
不可逆 |
20mg/mL (H2O) |
1 to 100mM |
| β-甘油磷酸鈉(二鈉鹽) |
216 |
絲氨酸-蘇氨酸磷酸酶 |
可逆 |
10mg/mL (H2O) |
1 to 100mM |
| 焦磷酸納 |
221.9 |
絲氨酸-蘇氨酸磷酸酶 |
不可逆 |
65mg/mL (H2O) |
1 to 100mM |
| AEBSF•HCl |
239.5 |
絲氨酸蛋白酶 |
不可逆 |
200mg/mL (H2O) |
0.2 to 1.0mM |
| 抑肽酶 |
6511.5 |
絲氨酸蛋白酶 |
可逆 |
10mg/mL (H2O) |
100 to 200nM |
| Bestatin |
308.4 |
氨肽酶 |
可逆 |
5mg/mL (MeOH) |
1 to 10µM |
| E-64 |
357.4 |
半胱氨酸蛋白酶 |
不可逆 |
20mg/mL(1:1 EtOH:H2O) |
1 to 20µM |
| EDTA |
372.2 |
金屬蛋白酶(螯合陽離子) |
可逆 |
10g/100mL (H2O) |
2 to 10mM |
| 亮抑酶肽 |
475.6 |
絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶 |
可逆 |
1mg/mL (H2O) |
10 to 100µM |
| Pepstatin A |
685.9 |
天冬氨酸蛋白酶 |
可逆 |
1mg/mL (MeOH) |
1 to 20µM |
| PMSF |
174.2 |
絲氨酸蛋白酶 |
可逆 |
18mg/mL (MeOH) |
0.1 to 1.0mM |
常用蛋白酶抑制劑混合物組成
| 抑制劑 |
工作濃度 |
靶點(diǎn) |
| AEBSF |
1mM |
絲氨酸蛋白酶 |
| 抑肽酶 |
800nM |
絲氨酸蛋白酶 |
| Bestatin |
50μM |
氨肽酶 |
| E-64 |
15μM |
半胱氨酸蛋白酶 |
| 亮抑酶肽 |
20μM |
絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶 |
| Pepstatin A |
10μM |
天冬氨酸蛋白酶 |
| EDTA* |
5mM |
金屬蛋白酶(螯合陽離子) |
*EDTA影響蛋白活性時，需實驗是否需要添加EDTA
產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
Cas |
包裝 |
| S118142 |
氟化鈉 |
昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)級, ≥99% |
7681-49-4 |
100g,500g |
| D106347 |
β-甘油磷酸鈉五水合物 |
>95.0%(T) |
13408-09-8 |
25g,100g,500g |
| S108847 |
焦磷酸鈉 |
AR,99.0% |
7722-88-5 |
500g,20*500g,2.5Kg |
| A301905 |
AEBSF溶液 |
50mg/ml in H2O |
30827-99-7 |
0.5mL,1mL |
| A301913 |
AEBSF溶液 |
10mg/ml in H2O |
30827-99-7 |
0.5mL,1mL |
| A301991 |
抑肽酶溶液 |
1mg/ml in water |
9087-70-1 |
1mL |
| B113164 |
烏苯美司(Bestatin) |
超純級，>99% |
58970-76-6 |
10mg,100mg,50mg,500mg,1g |
| E109034 |
E-64 |
蛋白酶抑制劑,99% |
66701-25-5 |
5mg,25mg,100mg |
| E112489 |
乙二胺四乙酸(EDTA) |
99%,用于細(xì)胞培養(yǎng) |
60-00-4 |
100g,500g |
| L111765 |
亮抑酶酞 |
≥90%(HPLC) |
103476-89-7 |
1mg,5mg,25mg,100mg |
| P113168 |
胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin A) |
≥75% (HPLC) |
26305-03-3 |
5mg,10mg,25mg |
| P105539 |
苯甲基磺酰氟(PMSF) |
≥98.0% (GC) |
329-98-6 |
5g,25g,100g |
| P301906 |
PMSF溶液 |
100mM in ethanol |
329-98-6 |
1mL |
| P301902 |
蛋白酶抑制劑混合物 |
100×,不含EDTA |
- |
1mL |
| P301903 |
蛋白酶抑制劑混合物 |
100×,無動物源性 |
- |
1mL |